細(xì)胞學(xué)堂｜原代細(xì)胞培養(yǎng)包被如何操作

原代細(xì)胞具有貼壁特殊性，因此在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，常出現(xiàn)貼壁不牢的情況，因此我們需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被處理，以增強(qiáng)細(xì)胞的貼壁性。

本期細(xì)胞學(xué)堂將為您詳述原代細(xì)胞培養(yǎng)中的包被操作步驟及注意事項(xiàng)，讓您的實(shí)驗(yàn)順暢無(wú)阻！

為了適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求，需要對(duì)培養(yǎng)器皿用不同的物質(zhì)包被后使用，包被條件常選用膠原蛋白Ⅰ（12μg/mL）、多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/mL）和明膠（0.1%）三種，依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。

膠原蛋白Ⅰ是最常見(jiàn)的膠原蛋白，能促進(jìn)細(xì)胞的貼壁和增殖，常用于上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、肌細(xì)胞等原代細(xì)胞的培養(yǎng)；

多聚賴(lài)氨酸是一種合成化合物，是帶正電荷的氨基酸，通過(guò)改變培育基質(zhì)外表的電極來(lái)促進(jìn)細(xì)胞貼壁，其包被的培養(yǎng)板適用于神經(jīng)元細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的培養(yǎng)；

明膠來(lái)自于膠原的高分子量水溶蛋白混合物，0.1％的明膠溶液常用于包被培養(yǎng)器皿以促進(jìn)細(xì)胞貼壁。明膠包被板常用于培養(yǎng)正常或轉(zhuǎn)染細(xì)胞如血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、胰島細(xì)胞等。

包被試劑的保存：無(wú)菌多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/mL）需要4℃下保存，可保存三個(gè)月；無(wú)菌膠原蛋白Ⅰ（12μg/mL）和無(wú)菌明膠（0.1%）需要在4℃下保存，1-2周內(nèi)使用，蛋白制品放置過(guò)久易失效；

選擇包被液用量依據(jù)不同培養(yǎng)器皿而定，一般確保培養(yǎng)器皿底部完-全覆蓋為準(zhǔn)（并且確保包被時(shí)間內(nèi)不干）；

PLL有輕微毒性，膠原蛋白Ⅰ、明膠配置溶劑部分有少量毒性，所以包被后的培養(yǎng)器皿，使用前必須用PBS或培養(yǎng)基清洗1-3次；

細(xì)胞爬片等玻璃制品因材質(zhì)問(wèn)題，本身吸附能力弱，一般必須包被；

包被分為包被時(shí)間和干燥時(shí)間，包被時(shí)間是包被液吸附作用時(shí)間，一般按推薦時(shí)間即可。干燥時(shí)間是包被后培養(yǎng)器皿晾干時(shí)間，是為了確保包被液晾干，達(dá)到更好的粘性吸附效果；