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培養(yǎng)BV2細(xì)胞時(shí)，最常遇到的問題就是細(xì)胞形態(tài)異常，通常伴隨著細(xì)胞形狀改變、拉絲較多等，對大家的實(shí)驗(yàn)造成影響。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了BV2細(xì)胞的培養(yǎng)方法、常見問題及處理方法，幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞生長特性
① 半貼半懸：懸浮和貼壁細(xì)胞比例不固定；
② 多形性：懸浮細(xì)胞為圓形，貼壁細(xì)胞既有圓形（飽滿圓潤，邊緣亮）也有梭形（向兩端伸出黑色突起）、多邊形。
BV2細(xì)胞顯微鏡圖
培養(yǎng)方法
BV2細(xì)胞的傳代
01
用移液器吸出細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液（含有懸浮細(xì)胞），轉(zhuǎn)移到無菌離心管A中；
02
用1 mL PBS潤洗細(xì)胞，吸出PBS放入到上一步裝有培養(yǎng)液的離心管A中；
03
培養(yǎng)瓶中加入1 mL胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使胰酶浸潤所有細(xì)胞，放入37℃培養(yǎng)箱靜置消化（消化時(shí)間跟據(jù)細(xì)胞生長時(shí)間稍有不同，消化時(shí)間一般為2~4 min，可以消化1 min后拿出來在顯微鏡下觀察，若還未消化完-全就放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化，直到顯微鏡下看到細(xì)胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞有滑落跡象，可終止消化），全程不要拍打培養(yǎng)瓶；
04
培養(yǎng)瓶中加入3 mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹幾下將細(xì)胞吹落到液體中，再輕吹5~10下使細(xì)胞均勻分散，盡量在顯微鏡下呈單顆懸浮；
05
將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管A中，1200 rpm離心3 min；
06
棄上清，加入2~3 mL新鮮培養(yǎng)基重懸沉淀，按傳代比例分裝到新的培養(yǎng)瓶或者皿中，補(bǔ)足培養(yǎng)基，最后輕吹幾下讓細(xì)胞分散均勻。
注意事項(xiàng)
BV2細(xì)胞是半貼壁半懸浮細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的比例不固定，因此傳代的時(shí)候需要單獨(dú)收集懸浮和貼壁部分的細(xì)胞進(jìn)行處理。如果懸浮的細(xì)胞不到10%，貼壁的細(xì)胞密度有80%以上，這個(gè)情況傳代的時(shí)候也可以不收集懸浮細(xì)胞。
BV2細(xì)胞的凍存
凍存液推薦配比：
55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；
注意事項(xiàng)
細(xì)胞到貨穩(wěn)定培養(yǎng)2~3代后，建議及時(shí)凍存保種，推薦凍存密度2~3×106 cells/mL。由于細(xì)胞凍存成功率往往無法達(dá)到百分-之百，一般建議邊傳代邊凍存，每次凍存后需復(fù)蘇一支凍存管驗(yàn)證細(xì)胞活率。
培養(yǎng)常見問題及處理方法
01
剛收到貨時(shí)，細(xì)胞整體偏圓形較多，而后續(xù)培養(yǎng)時(shí)梭形較多是怎么回事？
細(xì)胞形態(tài)會隨著密度的改變發(fā)生變化。BV2細(xì)胞增殖較快，到貨時(shí)由于運(yùn)輸震蕩的原因，部分細(xì)胞會出現(xiàn)收縮，此時(shí)細(xì)胞密度較高，圓形相對較多；在后續(xù)培養(yǎng)中，按照1:2~1:4傳代24 h時(shí)，細(xì)胞主要以梭形為主；后續(xù)隨著細(xì)胞密度越來越高，圓形細(xì)胞會逐漸變多。
02
傳代培養(yǎng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞拉絲、觸角較多，如何調(diào)整？
BV2細(xì)胞以較低密度傳代后，容易出現(xiàn)拉絲、觸角較多的情況。這種情況可以先收集培養(yǎng)基中懸浮或貼壁不牢的細(xì)胞于15 mL離心管中，貼壁的細(xì)胞用胰酶消化1 min左右后終止消化，收集消化下來的的細(xì)胞（多觸角或者拉絲很長的細(xì)胞，短時(shí)消化不容易消化下來，可以被篩掉），然后計(jì)數(shù)傳代，培養(yǎng)一段時(shí)間后細(xì)胞狀態(tài)會有好轉(zhuǎn)。沒有消化下來的細(xì)胞也可以提高細(xì)胞密度傳代，重復(fù)此步驟，收集偏圓形的細(xì)胞培養(yǎng)。
03
培養(yǎng)過程梭型細(xì)胞比圓形細(xì)胞多，梭型是不是細(xì)胞分化了？
細(xì)胞受到LPS刺激后易分化，而常規(guī)培養(yǎng)過程是不會自發(fā)分化的。關(guān)于哪種形態(tài)是分化，并沒有統(tǒng)一的定論，有的文獻(xiàn)描述分化細(xì)胞是長梭型細(xì)胞增加，有的文獻(xiàn)稱分化細(xì)胞偏圓形，建議通過檢測相關(guān)的指標(biāo)變化來判斷是否分化。
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