常見的細胞輔助試劑及其應用

　　細胞輔助試劑在細胞培養(yǎng)、流式細胞術等實驗中發(fā)揮著關鍵作用，它們能夠優(yōu)化實驗條件、提高實驗效率并確保結果的準確性。以下是一些常見的細胞輔助試劑及其應用：
 

　　一、細胞培養(yǎng)輔助試劑
 

　　L-谷氨酰胺
 

　　作用：細胞培養(yǎng)中細胞進行能量生成以及蛋白質和核酸合成所必需的一種營養(yǎng)素。
 

　　特性：不穩(wěn)定，在中性溶液中會自發(fā)降解，降解率隨保存溫度而變。降解后生成的副產(chǎn)物氨對干細胞、原代細胞等具有毒性。
 

　　替代品：L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，其在水溶液中穩(wěn)定性高，可保持長時間穩(wěn)定的營養(yǎng)供給，并降低分解產(chǎn)物造成的細胞毒性。
 

　　胰島素
 

　　作用：對哺乳動物細胞具有多效合成作用，促進葡萄糖和氨基酸攝取、脂肪生成、單價陽離子和磷酸轉運、蛋白質和核酸合成。
 

　　應用：MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素以維持細胞狀態(tài)。
 

　　β-巰基乙醇
 

　　作用：維持細胞內的還原環(huán)境，保護細胞免受氧化損傷。
 

　　應用：Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞需要添加β-巰基乙醇以維持細胞狀態(tài)。
 

　　平衡鹽溶液
 

　　組成：主要由無機鹽、葡萄糖組成。
 

　　作用：維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。同時用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。
 

　　其他添加劑
 

　　非必需氨基酸(NEAA)：含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到原培養(yǎng)基中可提供更全面的營養(yǎng)支持。
 

　　HEPES：一種很強的緩沖劑，能使細胞培養(yǎng)基在pH7.2-7.6條件下緩沖能力增強，防止培養(yǎng)基pH迅速變動。
 

　　二、流式細胞術輔助試劑
 

　　紅細胞裂解液
 

　　作用：利用低滲原理破碎血液或骨髓標本中的紅細胞，消除紅細胞產(chǎn)生的干擾，從而實現(xiàn)對白細胞的表面抗原的準確分析。
 

　　特性：溫和的低滲條件下裂解紅細胞，操作簡單，紅細胞裂解，性能穩(wěn)定，產(chǎn)生細胞碎片少。
 

　　固定破膜劑
 

　　作用：對細胞懸液進行固定和破膜，使抗體順利進入胞內，并使細胞形態(tài)仍然保存完整。可以減少實驗中非特異性染色，在加入破膜劑時也可以加入熒光標記抗體進行染色。
 

　　特性：破膜后細胞分群保持完整，溶血、破膜、染色一步完成，操作簡便，保持抗體的特異性、靈敏度以及可重復性。
 

　　刺激阻斷劑
 

　　作用：刺激細胞活化，提高細胞因子分泌量，便于檢測；同時阻斷細胞因子分泌到細胞外，使其聚集在細胞內，提高檢出率。
 

　　常用試劑：刺激素為Phorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA，佛波酯)和Ionomycin(離子霉素)，阻斷劑為Brefeldin A(BFA，布雷非德菌素A)和Monensin(莫能霉素)。
 

　　流式染色緩沖液
 

　　作用：適用于懸浮細胞的免疫熒光染色實驗，含BSA以疊氮鈉作為防腐劑。可用于抗體和細胞的稀釋，以及表面染色和流式分析的洗滌階段。
 

　　特性：有效降低非特異性結合，適用于各種流式細胞術實驗。
 

　　封閉試劑
 

　　作用：封閉細胞表面的Fc受體，減少抗體的非特異性結合，降低檢測背景，獲得更清晰的結果。
 

　　常用試劑：FcR阻斷劑(如CD16和CD32抗體)。